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在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清天然凝結、縮短后即可獲得。ELISA試劑盒也可在板孔中參加稀釋液，然后在微型震動器上震動1分鐘以確保混和。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超越一周測定的需低溫冰存。
可用作ELISA試劑盒測定的標本非常廣泛，體液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、大便)等均可作標本以測定其間某種抗體 或抗原成份，ELISA試劑盒中本次實驗不需用的有些應及時放回冰箱保留。在間接法ELISA試劑盒中可使本底加深。
本文將敘說ELISA試劑盒板式ELISA各個操作過程的留心關鍵，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特別儀器合作應用，嚴厲遵循劃定操作，必能得出準確的成果。ELISA試劑盒加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，防止加在孔壁上部，并留心不行濺起，不行產氣憤泡。有此測定(如間接法ELISA)需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。